01
IVD企业内部参考品
在体外诊断试剂中，参考品是检测系统质量控制的重要组成部分。其主要包括标准品、校准品和质控品。
在IVD检测试剂开发过程中，建立参考系统是产品立项后的首要工作。参考国家标准、行业标准，结合产品的预期性能，建立产品内部参考系统，用于试剂后续研发、生产的质量控制。所谓“兵马未动，粮草先行”。而内部参考品则是参考系统的重要组成部分。
IVD试剂生产企业使用企业内部参考品，即我们常说的“内参”，用于产品研发和生产阶段的质量控制。甚至有些企业成立参考系统部门，承担包括内部参考品制备在内的产品质量控制工作。
内部参考品可以评价关键原材料的性能，以选择最优的原料；可以评价工艺体系，以优化配方；可以验证产品性能，以判断生产产品是否符合预期。可以说，内部参考品就是企业标准，用于质量控制，如“度量衡”，在产品生命周期尤其是研发、生产过程中，负责优化、纠偏、评判，确保产品性能符合设计预期，保证产品的有效性。
我们可以从法规等更深层次去探究为何内部参考品如此重要。
02
医疗器械产品的核心
医疗器械产品的核心是“安全”、“有效”。
2021年3月18日，国务院颁布《医疗器械监督管理条例（2021）》。在条例中，“安全”“有效”两个词出现的频率均高达40次。条例总则第一条即明确：“为了保证医疗器械的安全、有效，保障人体健康和生命安全，促进医疗器械产业发展，制定本条例。”
中国食药监在《医疗器械生产质量管理规范（2015）》也明确“保障医疗器械安全、有效，规范医疗器械生产质量管理”。
《医疗器械注册质量管理体系核查指南》对第二类、第三类医疗器械注册质量管理体系现场核查提出具体操作指南：在产品开发过程中，设计和开发输入应当包含参考物质等；在采购过程中，应当对体外诊断试剂质控品、企业参考品的原材料采购如涉及人体来源的样本，应当重点关注其生物安全性。
多个文件均把“安全有效”置于首要位置，见图1。目的是通过确保医疗器械的安全有效来保障人民健康和生命安全。对IVD产品研发、生产而言，建立精确的参考系统，利用内部参考品，是保证产品安全有效的手段之一。而内部参考品的原料来源、生物安全性等，是“安全有效”不可忽视的问题。
图1：法规文件
03
抗体类内部参考品的原料来源
03
在免疫诊断中，常见的内部参考品包括抗体类和抗原类。抗体类内部参考品的原料来源主要有两个途径：阳性血清和人源化单抗。
阳性血清来源的内部参考品，是通过混合不同个体的血清样本，用阴性血清稀释，再添加其他辅助成分制得。其材料直接来源于人体血液。人源化单抗来源的内部参考品，是用无机盐溶液稀释人源化单抗，添加动物血清或惰性蛋白制得。也可以用阴性血清稀释。其材料来源和成品可不含人体血液成分。
我们尝试从“安全有效”的角度去分析。
（1）生物安全角度。当前，中国对人体血液管理是严禁进出口和自由交易。国务院在《中华人民共和国献血法》、《血液制品管理条例（2016）》等文件中明确：血液原料中可能含有病原体（如HIV、HBV、HCV等），应确保其安全性。《中华人民共和国传染病防治法（1989）》强调：疾病预防控制机构、医疗机构使用血液和血液制品，必须遵守国家有关规定，防止因输入血液、使用血液制品引起经血液传播疾病的发生。禁止非法采集血液或者组织他人出卖血液。因此，相比血液，人源化单抗制备的内部参考品的生物安全性更高。
（2）有效角度。在血清学诊断中常见的标志物是IgG和IgM。人体免疫球蛋白的血清总含量见图2。针对特定抗原决定簇的特异性抗体含量则更少，尤其是IgM。高滴度血液IgG、IgM较难获得，直接影响高值参考品的制备。人源化单抗即可结合特异性标靶，也含有人源序列，可被抗人二抗特异性识别。根据赋值要求，添加人源化单抗以制备任意值的参考品。
（3）应用角度。我们知道血液成分复杂，个体差异更导致不同来源血液的基质有差异。通过混合血液方法制备参考品，控制批内差、批间差的技术难度更大。此外，血液样本中可能存在的药物、激素、溶血现象等，可能会影响检测。人源化单抗保留单抗均一的特性，基质可根据工艺调配，可操作性更广。
当然，血清样本也有其不可替代性。如产品注册的临床试验阶段有严格的样本入组原则。样本应包括不同病例，早、中、晚期，不同性别、不同年龄层次等，以便能反映该病的全部特征。
04
人源化单抗参考品的使用
实际上，使用人源化单抗制备参考品应用于诊断试剂早有先例。中国药监局发布的包括《肺炎支原体IgM/IgG抗体检测试剂注册技术审查指导原则》等文件中，提及人源化抗体可作为参考品使用。见图3。
图3：《肺炎支原体IgM/IgG抗体检测试剂注册技术审查指导原则》
在Abbott一项关于弓形虫参考品的研究中，发现人源化单抗制备的参考品与病态血清相比，两者相关性高达0.98以上，且人源化单抗具有更高特异性。见图4。
05
总结
医疗器械是国家“十四五”规划的重要组成部分，通过确保医疗器械的安全有效来保障人民健康和生命安全。同时，安全有效也是医疗器械技术审评的核心。对于IVD生产厂家而言，建立安全有效的内部参考系统，是实现产品安全有效的内部保障。人源化单抗在有效方面可满足参考品的技术要求，在安全方面可满足国家对生物安全要求，是制备参考品的理想原料。
1、《医疗器械监督管理条例（2021）》
2、《医疗器械生产质量管理规范（2015）》
3、《医疗器械注册质量管理体系核查指南》
4、《中华人民共和国传染病防治法（1989）》
5、定性检测用体外诊断试剂的企业内部参考品的设置，董劲春。
6、体外生物诊断试剂参考物质的现状与发展，王菲菲。
7、Consensusof a Group of Professional Societies and Diagnostic Companies.
编辑：Steven | 校对：Harris | 责编：Hillson
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