最近看了很多网友分享的酶与抗体的偶联方法，发现其中HRP的偶联Protocol还算稍微真实一些，AP的偶联应该都是基于半保密状态写的，很多Protocol水分太大或者效率太低，比如戊二醛法、EDC法等。今天基于双功能试剂偶联方法给大家分享一个企业真实在用的SOP，避免大家走弯路。
1.1 SMCC(SM(PEG)n Crosslinkers)，这里暂取n=8；
1.5 A液：0.1M PBS，2mM EDTA ，pH7.2；
1.6 B液：0.1M PBS，2mM EDTA ，pH8.0；
（二）偶联过程
2.1.2 SM(PEG)8 100uL加入480uL DMSO；
2.1.3 4uL SM(PEG)8加入1mL AP，25℃ 混匀30min；
2.1.4 30kD超滤管去盐2-3次，最终1mL A液复溶。
2.2.2 2mg Traut’s Reagent加入1mL B液溶解；
2.2.3 46uL Traut’s Reagent加入1mL IgG，25℃混匀60min；
2.2.4 100kD超滤管去盐2-3次，最终1mL A液复溶。
备注：
1. AP的来源和活性均不同，分子量对应也不同，需要自己测试最佳种类；
2. 如果测试酶联产物活性不够，可考虑置换活化顺序，变成SM-IgG和2IT-AP；
3. 如果担心抗体存在游离，可以降低偶联量，如将10mg降低。理论上如果AP相对于IgG过量，就不用做后续的纯化。
讨论：
目前在大部分人的认知里，HRP系统在稳定性方面不如AP，本人暂未对两个系统平行对比过，只是目前用着HRP酶联系统，感觉没有人们想的那么弱，而且成本也是相当的便宜。个人觉得试剂的性能参数主要还是和原材料的选取关系更大，跟用哪个酶貌似没有特别大的关系。
关于AP针对于HRP的明显优势在哪里，大家有没有好的答案呢？欢迎加群来讨论。
文章来源于IVDdiagnosis，作者IVDdiagnosis
编辑：Jason | 校对：Harris | 责编：Hillson
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