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德国维润赛润CACLP展位号:B5-0805
在谈酶促发光之前,我想先谈一谈目前国内发光试剂的种类。目前我了解的目前国内发光的主要类型有4种:直接发光、酶促发光、电化学发光、光激发光。
电化学发光不说了,专利在罗氏手里,目前国内在做的有联众泰克、普门等,算是发光里面比较先进的。
光激发光用的是配体的偶合发光,也就是不借助磁珠这种介质,使得反应可以达到均质,理论上反应时间也会很短,目前科美生物在用,但是科美和爱兴关于专利的纠葛,同学们自己去了解吧;
直接发光和酶促发光应用的厂家最多,比如新产业的异鲁米诺直接发光,源德生物的HRP发光,迈瑞的ALP发光等。
直接发光在理论上而言,是优于酶促发光的,因为它属于闪光型,加上显色底物就开始读数,时间把控的比较到位,但是仪器开发可能不如酶促的简单一些。
目前酶促发光最常用的酶就是HRP和ALP。
HRP催化的发光系统,是发展较早也是最成熟的,大家都知道用过氧化氢-鲁米诺系统。只不过刚开始接触的研发,你们会发现它的半衰期很短,发光效率很低。本来发光值就不高,可能2分钟还衰减了50%,难以接受。其实国外的学者早就帮你解决了这个问题,加光增强剂。常用的增强剂就是苯酚的衍生物,一般可以是卤代物,或者是甲氧基取代物等等,只要加进去,立马解决相关问题。具体怎么配制,自己去摸索,反正万卷不离其宗。
ALP的催化底物要相对多一些,一般企业常用的就是AMPPD或者是APS-5。相对于HRP底物的A+B模式,这个相对简单一些,单组份就可以。APS-5的发光效率要优于AMPPD,但是稳定性和催化温度的灵活性不如AMPPD,所以企业还是要根据试剂本身的特点进行选择。当然了,与HRP类似,碱性磷酸酶的催化也是需要增强剂的,否则发光效率低,进入平台期的时间慢。这个增强剂通常是蛋白类或者季铵盐类的表面活性剂,加进去发光值增加至少2个数量级。
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