大家好,我们POCT层析产品的方法学原理,大家都知道有夹心法、竞争法、捕获法或者说是间接法。
为了满足某些项目的特别需求,在原来的基础上衍生出了一些更为复杂的方法,接下来给大家介绍四种衍生出来的方法学原理。
第一个是夹心竞争法,又称中和抑制法
将夹心法和竞争法组合在一起,比如检测某抗体,我们在样品垫上处理对应的抗原Ag,标记垫标记对应的抗体Ab1,T线上也包被对应的抗体Ab2。
当样本为阳性时,样本中的抗体与样品垫的抗原结合,形成Ab-Ag1复合物,然后再与标记的抗体Ab1结合,形成Ab-Ag1-Ab1-Au复合物,该复合物将不在与T线反应,结果不限色。
当样本为阴性时,样品垫的抗原与标记的抗体Ab1结合,形成Ag1-Ab1复合物,然后该复合物与T线的Ab2结合,形成Ab2-Ag1-Ab1-Au复合物,结果显红色。
该方法主要是用于某些抗原性能好,但是不适用于标记,或者手头上可用抗原只有一个不能双抗原夹心(或者双抗体夹心)的项目。
第二个是夹心捕获法,
将夹心法和捕获法组合在一起,比如检测某抗体IgM,我们在样品垫上处理对应的抗原Ag,标记垫标记对应的抗体Ab,T线上包被对应的抗人IgM抗体。
当样本为阳性时,样本中的抗体IgM与样品垫的抗原结合,形成IgM-Ag复合物,然后再与标记的抗体Ab结合,形成IgM-Ag-Ab-Au复合物,该复合物继续与T线的抗人IgM二抗结合,形成抗人IgM抗体-IgM-Ag-Ab-Au复合物,结果显红色。
当样本为阴性时,样品垫的抗原与标记的抗体Ab结合,形成Ag1-Ab-Au复合物,然后该复合物不与T线的抗人IgM二抗结合,结果不显色。
该方法主要也是用于某些抗原性能好,但是不适用于标记,需要通过相应的抗体来连接,与后面的搭桥标记类似。
第三个是生物素-链霉亲和素+夹心法,
将生物素和链霉亲和素引用进来,可以达到放大信号的效果,提高灵敏度。比如检测某抗原,我们在样品垫上处理对应的抗原Ab1-Bio,标记垫标记对应的抗体Ab2,T线上包被SA。
当样本为阳性时,样本中的抗原与样品垫的抗体Ab1结合,形成Bio-Ab1-Ag复合物,然后再与标记的抗体Ab2结合,形成Bio-Ab1-Ag-Ab2-Au复合物,该复合物与T线的SA反应形成SA-Bio-Ab1-Ag-Ab2-Au复合物,结果显红色。
当样本为阴性时,样品垫的抗体Ab1与T线的SA反应形成SA-Bio-Ab1复合物,结果不显色。
该方法主要是用于提高产品的灵敏度,因理论上一个SA可以结合4个Bio,不过特异性也会经受较大考验,且样本中的生物素会给结果带来风险。
第四个是夹心法-搭桥标记,
该方法主要是在标记端与常规方法不一致,因某些抗原不适用于标记,这个时候我们将这个重组抗原加入一段标签,然后再对这段标签制备对应抗体,用胶体金标记标签抗体,然后与标记抗原结合,形成Ag1-Ab-Au复合物。其他过程跟双抗体夹心一致,这里就不在加以解释。
还有什么其他的衍生方法呢,欢迎在留言区与大家分享,谢谢!
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