对于胶体金的标记，大家都知道这是最关键的两步，但是同样的实验交给不同的实验员去做，我经常发现每个人摸索的最佳标记pH和最佳标记量都是不太一致的，这可能跟每个人的操作习惯、经验认知或者是后期的配方体系有关系。
对于最佳标记pH的摸索，我发现有人习惯用塑料的EP管去操作，有人喜欢用酶标板或者血清稀释板去操作，有的人喜欢用玻璃冻干瓶去操作。因此很早之前我把不同的标记容器对比了一遍，发现结果确实是不同的。尤其是对于塑料离心管，不同厂家的管摸索出来的条件也是不同的。比如Axygen的低吸附管，eppendorf的低吸附管，以及国产某厂家的低吸附管，摸索出来的碳酸钾的加入量分别是6ul、7ul、8ul；相同的抗体标记，玻璃冻干瓶摸索出来的则为5ul；酶标板摸索出来的为7ul(该判定结果截止封闭剂加入前，自然光下目测，以紫色和红色的临界点判定)。我们来看一下，不管是离心管还是酶标板，相对于玻璃材质，对于胶体金的标记，都需要更多的碳酸钾来维持标记环境的稳定性。对于塑料材质，由于不同厂家的生产工艺不同，对颗粒的吸附性也有大有小，其中Axygen的材质貌似与玻璃材质更接近，它的静电吸附和微球挂壁情况确实会轻一些。但是到底哪个加入量才是我们后期真正需要的呢？我把封闭剂加进去，反应30min，都转移到爱思进离心管，然后离心观察各个标记条件的沉淀和复溶情况，这时候发现，不同的标记条件，如果达到复溶液加入即可悬浮特别好、无碎片的情况，碳酸钾的加入量都集中在7ul附近。这说明了一个什么问题呢？我们决不能说eppendorf的离心管有胶体金标记的指导意义，即使有那也是针对于这一个项目，只能说玻璃材质有时候会蒙蔽我们的眼睛，材质不好的塑料又会表现的过于消极。我只能建议大家，如果想真正测试一种标记材质的好坏，还是尽量把整个实验流程走完，不要仅把抗体加进去看看颜色就拉倒了，后期的反应变化不是我们能预料的。比如封闭剂的种类的选取，复溶液的理化环境，都直接影响了后期的判断。有的人喜欢用氯化钠破坏法验证最佳标记pH，我不喜欢那么做，就是因为同样的道理。
对于最佳标记量，一些人觉得不是特别重要，另一些人却极致追求刚好饱和标记那个点。以我的个人经验，对于万分之一的胶体金，一般围绕5ug/ml摸索，对于更高浓度的胶体金，可以按比例增加。比如万分之二，你可以试试10ug附近。标记量太少，灵敏度不够；标记量太多，灵敏度还是不够。所以抗体加入不在多少，在于合适。我不晓得大家在最终标记完成之前，有没有离心清洗这个步骤，如果没有，就是我上述说的抗体加多了反而导致灵敏度偏低的原因；如果有，那我还是建议您尽量减少甚至取消这个步骤，因为胶体金不同于塑料微球，一遍一遍的压缩再复溶终归是不利的。另外就是复溶液的前期选取也尽量简单，就像前辈们说的，碱性缓冲+BSA+糖，一般就可以满足大部分的项目，避免由于其他组分的加入影响实验结果，影响我们最终的判断。
其实在实验中，我发现不同的人，用相同的标记条件标记，结果也会有差异，有的人手轻，有的人手重。比如抗体加入后，有的人习惯轻轻颠倒混匀，有的人习惯暴力震荡混匀，那哪种情况好呢？还是那句话，看最终结果吧，有时候做的轻手轻脚的也不见得优于那些大力出奇迹的结果。
最近一些人会提问一些胶体金的问题，所以跟大家谈一谈自己的一些经验。说实话，由于现在很少做胶体金了，加上之前做的项目也很少，能力确实有限，只能不针对具体项目，从客观层面谈论一些从业经验。如果有问题，还是建议大家在各个交流群里讨论，万一里面某个艾康系美康系的前辈某天突然来了兴致给你解答一下，大家也能集体收益，蛮不错。
来源：IVDdiagnosis
编辑：Jason | 校对：Harris | 责编：Hillson
公司简介
德国维润赛润（Institut VirionSerion GmbH）成立于1978年，是国际知名的诊断产业原料生产商和供应商。公司的研发和生产基地位于德国维尔茨堡，已通过DIN EN ISO 13485质量体系认证，拥有三级生物安全实验室(P3实验室)。经过了40余年的发展，公司构建了丰富的生物原料产品线，主要包括天然抗原、重组抗原、人源化单克隆抗体和磁珠等。
助力我们的客户更加强大
永葆我们的价值无可替代
免责声明：本文仅代表作者本人观点，不代表维润赛润资讯的观点和立场。文章图片均来源于网络，如有侵权，请联系作者删除,欢迎联系小编。
