检测抗体稳定性的9种主要方法

添加时间:2022年9月27日

检测抗体稳定性的9种主要方法

  • 德国维润赛润CACLP展位号:B5-0805
抗体的稳定性极大地影响其性能,如特异性和亲和力。而检测抗体稳定性的参数和方法有多种。据研究报道,抗体检测的参数可包括:
1)特异性
2)亲和力
3)纯度
4)聚集体
5)降解
6)热稳定性
检测抗体稳定性的9种主要方法
检测抗体稳定性的一些主要方法如下:
 
1、酶联免疫吸附实验 ELISA

酶联免疫吸附实验是将已知的抗原或抗体结合在固相载体表面,然后利用酶标记(偶联)的抗体或抗原与之孵育,在通过显色物显色,其显色深浅与待测物质的含量成正比,用肉眼即可观察。

    

可用于抗体的亲和力、特异性检测。

特点:已广泛应用,需要实验设备

检测抗体稳定性的9种主要方法

2、蛋白质印迹法 Western blot,WB

蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot,简称WB。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

 

可用于抗体的特异性、热稳定性和纯度检测

特点:已广泛应用,需要实验设备

检测抗体稳定性的9种主要方法

3、Biacore
Biacore 是基于表面等离子共振( surface plasmon resonance,SPR) 技术来实时定量检测生物大分子间的相互作用,而不用任何标记物。实验时先将1 种生物分子固定在传感器芯片表面,将与之相互作用的分子溶于溶液流过芯片表面。检测器能跟检测溶液中的分子与芯片表面的分子结合、解离整个过程的变化。这种相应的变化反映在传感图谱上,从传感图谱中提取结合反应动力学信息,得到分子相互作用的参数: 结合速率常数( ka) 、解离速率常数( kd) 及速率平衡常数( KA = ka /kd) 或解离速率平衡常数( KD = kd /ka) ,通过对分子间相互作用的动力学参数大小来评价生物分子间的相互作用。
    

可用于抗体的亲和力、特异性检测。

特点:快速,可实时提供结果,但仪器设备相对昂贵

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4、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS-PAGE

SDS-PAGE是一种变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳法,其原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白质分子所带的负电荷远超过天然蛋白质分子的静电荷,消除了不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按分子大小分离。

可用于抗体的纯度、聚集体、降解检测。

特点:已广泛应用,因使用变性样品,因此不检测生物学功能。

 
5、分子排阻色谱 Size exclusion chromatography ,SEC
分子排阻色谱( size exclusion chromatography,SEC) ,亦称之为凝胶过滤层析,是一类分离不同分子质量肽的重要色谱技术,其分离原理类似于过滤,是基于具有网状结构的凝胶颗粒发挥分子筛作用,在流动相的带动下筛选并过滤出分子质量不同的肽,分子质量越小的肽越能够进入凝胶的内部孔径中而导致留出时间越慢,而无法进入凝胶颗粒的大分子则可直接穿过凝胶颗粒的颗粒间隙流出( 图2) 。
  

可用于抗体的纯度、聚集体、降解检测。

特点:已广泛应用,样品需稀释。

 

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6、动态光散射法 Dynamic light scattering,DLS

DLS 依赖于自由漫射材料,由于布朗运动随机传播,将在散射激光中产生快速变化的原理。这些强度波动的时间尺度需要几十纳秒到几百毫秒。这些变化与粒子的运动直接相关。获得从激光散射强度产生的信号并将其转换为自相关函数。这是测量粒度分布的基础。

 

可用于抗体的纯度、聚集体、降解检测。

特点:快速,需要特殊设备。

 

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7、差示扫描量热法 Differential scanning calorimetry,DSC

差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)是一种通过热力学角度研究分子稳定性的方法,近年来也常应用于蛋白质的稳定性分析。其基本工作原理为:蛋白质的去折叠过程需要吸收热量,DSC通过线性的升温,测量样品溶液与空白溶液热容上升的差值,并以此预测样品分子在不同溶液状态下的稳定性。

 

可用于抗体的热稳定性、未折叠检测。

特点:灵敏,可用于检测未折叠蛋白,但仪器设备相对昂贵

 

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8、差示扫描荧光法 Differential scanning fluorimetry ,DSF

差示扫描荧光(differential scanning fluorimetry, DSF)是在荧光定量PCR仪上缓慢加热样品,在加热的过程中检测荧光染料与结构发生改变的蛋白质相结合的量,来评价蛋白质热稳定性的方法。

可用于抗体的热稳定性、未折叠检测。

特点:检测方法灵敏,但需要实时PCR设备。

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9、圆二色谱 Circular dichroism,CD

圆二色谱(circular dichroism,CD)即是利用溶液中的光学活性分子(如蛋白质、DNA)的圆二色性解析其二级、三级构象的一项重要技术,目前被广泛应用于大分子立体结构与功能、相互作用的研究中。
可用于抗体的聚集体、未折叠检测。
特点:高通量检测。
 

除以上外,核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)和质谱(Mass spectroscopy ,MS)也已用于抗体稳定性测定。

德国维润赛润的人源化单抗原料清单

检测抗体稳定性的9种主要方法

参考文献:

1、Antibody stability: A key to performance – Analysis, influences and improvement
2、Biacore 法测定重组人乳头瘤病毒双价( 16 /18 型)疫苗原液的动力学常数*
3、色谱技术在肽分离中的应用
4、GB/T 29022-2012粒度分析 动态光散射法(DLS)
5、差示扫描量热法在抗体偶联药物稳定性研究中的应用
6、差示扫描荧光及其在蛋白质研究中的应用
编辑:Jason | 校对:Harris | 责编:Hillson

 
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公司简介

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德国维润赛润(Institut VirionSerion GmbH)成立于1978年,是国际知名的诊断产业原料生产商和供应商。公司的研发和生产基地位于德国维尔茨堡,已通过DIN EN ISO 13485质量体系认证,拥有三级生物安全实验室(P3实验室)。经过了40余年的发展,公司构建了丰富的生物原料产品线,主要包括天然抗原、重组抗原、人源化单克隆抗体和磁珠等。
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