领导给你一个项目,让你自己去寻抗体对,你挺卖力的,一下子寻了5家,好嘛,突然就懵逼了,一下子10个抗体,怎么筛适合自己的呢?
比如做免疫层析,首先,你把每个厂家各自的配对抗体彼此按照标记和包被互调顺序的方式进行测试(例:厂家1,A→B,B→A),如果筛选到了大致符合你心里预期的,基本上也就确定厂家了;如果感觉都没有符合预期的,只有两种情况,一是你试剂研发的体系不合格;二是这10种配对方式确实都没能符合预期。
从经验来看,市面上5家抗体都没挑出来凑合用的几乎不太可能,可能你的心理预期有点过高了,因为前期的筛选体系肯定不适用于全部的抗体对,我们秉承着矮子里面挑将军的心态应该更好一些。如果真是出现了情况二这种的,10种配对都是不分伯仲的小矮子,也不要轻易对自己的工作产生质疑,这时候有两种情况可以选择,一是继续找新的厂家测试,二是抗体筛选从厂家自配对变成厂家互配对。如果是你,你会选择哪种呀😁?很多人可能会选择第一种,因为对第二种的工作量望而却步。抗体互搭的话,10×10就是100种情况。减去之前测试的10种,那还要做90种互搭!对于免疫层析,90种互搭是一件很有工作量的事情,这么做应该是个傻子。然而,我就是那个傻子。
由于我有点强迫症,所以我一般只相信事实,并不相信概率的问题,概率通常意味着遗漏。如果条件允许,我一般会选取3个国产厂家,1个国外厂家。一般我的测试上来就是全面铺开的模式,直接就是8×8的棋盘测试。我不知道大家适不适应这种傻瓜式的操作,但是我还是挺推崇这种做法的,因为这让我后续的实验有底气,底气这种东西是能让人少走弯路的。所以一般我培养实验员,首先就是从不怕辛苦开始。我举个例子,原来我接手某个项目,辞职的人一共留了11个厂家(22种)抗体,说是没有筛选出能用的配对。如果按照22×22的配对模式,我要做484种测试,然而我真的就这么做了。每个抗体都包了板子,都标记了酶,像拉鱼网一样测试了2天,6块酶标板,结果让我生气的是,这484种结果中,至少400种是可用的😁。不过,收获就是我的酶标记手艺得到了提升,也筛选到了非常好的组合,同时验证了一件事,很大一部分的酶免筛选可以平行转移到层析平台。
还是讲一下。原料这种东西,基本上每个克隆都是原厂家在成百上千个克隆里挑选出来效价比较高的,我们可以怀疑他们推荐的搭配方式,但尽量别断定他们的抗体和抗原没反应。试剂厂家的工作,就是从这些高亲和力的抗体中再做出优化,筛选出更加符合性能的配对,其实我们应该庆幸,原料厂家给我们做的前期工作已经够多了,就差帮我们OEM了。
另外就是怎么筛。对于灵敏度要求高的,就选检出限附近的样本和阴性样本的信噪比来筛选;对于线性区间要求比较高的,可以再加上几个线性高值点。还是那句话,前期的筛选期望值不要太高,否则很容易心烦意乱。
放平心态,做了想到的就好。实验这种东西,做的时间长了就佛了,像是玄学,主打随缘。
来源:IVDdiagnosis
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德国维润赛润(Institut VirionSerion GmbH)成立于1978年,是国际知名的诊断产业原料生产商和供应商。公司的研发和生产基地位于德国维尔茨堡,已通过DIN EN ISO 13485质量体系认证,拥有三级生物安全实验室(P3实验室)。经过了40余年的发展,公司构建了丰富的生物原料产品线,主要包括天然抗原、重组抗原、人源化单克隆抗体和磁珠等。
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