对于缓冲盐，最常用的就是PB，Tris，CB(碳酸盐)，BB(硼酸盐)这几种。考虑到大部分蛋白都是pH中性条件下就很稳定，所以PB(pH7.2-7.4)的使用最为广泛。与磁珠的标记不同，蛋白在与NC膜接触到被快速烘干的一个过程，蛋白的空间构象到底发生了如何的变化，它到底是处于变性还是非变性状态，不同的缓冲盐对于蛋白关键位点的暴露到底有促进还是抑制作用，我们很难去说。所以我觉得大家在最初的研发阶段，还是尽量去试一试不同的缓冲盐。我在这里举个例子，之前有人问到，为什么我做的试剂，测试阴性样本，在爬膜3-5分钟的时候，T线总是有一个模模糊糊的印迹，但是等到了15分钟反应完成后T线就很白了，那个印迹消失了？这就跟缓冲液有一定的关系。
另外，对于磷酸盐，也是有PB和PBS两种，那么加氯化钠和不加氯化钠，有什么区别呢？对于大部分项目来说，加氯化钠能起到一些抑制假阳的作用，但是有的项目在抑制假阳的同时，阳性的显色也随之降低，尤其是包被抗原的时候，氯化钠加入与否的验证就显得十分必要。对于抗体的包被，很多项目加不加作用并不明显，有的项目加入了氯化钠，抑制假阳的同时，阳性样本增色也很明显，这时氯化钠的加入就取得了锦上添花的效果。并且，对于一些抗体亲和力特别强的抗体，经常出现T线下深上浅的情况，氯化钠的加入可能会有意想不到的作用。
对于糖，用蔗糖和海藻糖的都不在少数。糖的作用，对于大部分人，在观念里应该是起到了蛋白保护的作用，这倒是不假，尤其是海藻糖，在抗高温方面确实有自己的优势。但是它们也有提高蛋白的亲水性，并且还有封闭的作用。如果试剂的线条出现反白的情况，包被液中加入糖会有一定的改善作用(有的项目加入甲醇或者异丙醇也可以)，当然了这个作用可能并不明显，还得靠表面活性剂去配合。对于封闭作用，可能大家了解的不多。我负责过的一些双抗夹心的项目中，糖的加入确实明显的改善了假阳，糖的浓度越高，这个作用越明显，但是需要注意的是，改善假阳的同时，要注意阳性样本的显色变化。另外这里和大家提一下线条反白的问题，对于一些容易出假阳的项目，线条反白可能并不是坏事！
还有就是BSA和酪蛋白或者OVA、HSA等其他封闭蛋白的加入。很多人对包被缓冲液里面添加封闭蛋白持强烈的怀疑态度，觉得杂蛋白的加入会对目的蛋白的包被起竞争作用，导致目的蛋白包被不上或者包被效率低。我想说，这个你们多虑了，尤其是做小分子竞争法的项目，如果你试了，你就知道它们的加入到底有多好用。当然了，杂蛋白的用量确实是需要斟酌的，尤其是酪蛋白，用的好是锦上添花，用的不好，反而是一团乱麻。
最后就是表面活性剂。这个东西我一直不敢轻易使用，一些同僚说是遇到过疏水特别严重的或者假阳特别严重的蛋白，加入痕量的吐温或者Triton×100等表活就解决了。我自己试过，线条划出来比较宽，我是不太敢轻易使用的，尤其是定量项目。如果是定性项目，我倒见过通过二次划线来改善的，就是在T线烘干完成后，在原T线的位置重新划一些你想添加的物质，比如表活或者封闭剂，来抑制假阳，增加亲水性。不过这种做法都是老司机了，新手全当长长见识吧。
来源：IVDdiagnosis
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